几种促透剂联合使用对双氯芬酸钠体外经裸小鼠皮肤吸收的影响

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摘要：【摘要】 目的：研究几种促透剂联合使用对药物体外经皮渗透的影响。方法：在离体透皮吸收装置上，采用正交试验的设计方法研究不同浓度的氮酮、薄荷醇、冰片联用对双氯芬酸钠在离体裸小鼠背部皮肤上的透皮行为，以累积透过量、渗透速率和滞后时间为药效指标，

　　【摘要】 目的：研究几种促透剂联合使用对药物体外经皮渗透的影响。方法：在离体透皮吸收装置上，采用正交试验的设计方法研究不同浓度的氮酮、薄荷醇、冰片联用对双氯芬酸钠在离体裸小鼠背部皮肤上的透皮行为，以累积透过量、渗透速率和滞后时间为药效指标，运用Topsis法评价促透效果。结果：对双氯芬钠的促透作用，氮酮2%、薄荷醇2%、冰片1%联用促透效果最好，其中以氮酮的促透作用最为明显。结论：三种促透剂的联合使用能有效促进双氯芬酸钠的透皮吸收，Topsis法可客观、公正地评价促透剂的促透效果并选出最优方案。

　　【关键词】 氮酮　薄荷醇　冰片　双氯芬酸钠　透皮吸收　Topsis法

　　氮酮是目前应用最广泛的透皮吸收促进剂之一，薄荷醇和冰片是近年研究较多的萜类透皮吸收促进剂的代表［1］，薄荷醇和氯酮对双氯芬酸钠的促透作用已有研究［2，3］，但三者联用的促透效果未见文献具体报道。本研究采用正交设计法原理探讨氮酮、薄荷醇、冰片联用作为透皮吸收促进剂的促透效果，并采用Topsis法对实验结果进行综合评价。

　　1 材料与试剂

　　1.1 动物

　　Balb/C裸鼠，SPF级，雌雄各半，体重16～18g，由本院实验动物中心提供，动物合格证号为2005A025。

　　1.2 药品与试剂

　　双氯芬酸钠粉剂由广东省药检所提供；氮酮为福建寿宁美菲斯生物化学制品厂产品；薄荷醇系上海香料厂生产；合成冰片(龙脑59.9%，异龙脑37.5%)由广州化工厂生产。

　　1.3 仪器

　　ZD85型气浴恒温振荡器，深圳国华仪器厂；752型紫外分光光度计，上海分析仪器厂。

　　2 方法

　　2.1 离体皮肤的制备

　　颈椎脱臼法处死裸小鼠，取背部皮肤，把皮下组织剥离干净，用生理盐水反复冲洗，用稍润有生理盐水的纱布包裹皮肤，4℃保存，于第2天选择无肉眼可见伤痕的皮肤供透皮吸收试验使用。

　　2.2 干扰试验

　　按本研究“2.6”项下的透皮试验方法，取12h时间点的透皮接收液，在200nm～350nm波长范围内扫描，最大吸收峰出现在271nm处，未见有干扰峰出现。

　　2.3 标准曲线的制作

　　精密称取双氯芬酸钠50.0mg，置于100ml容量瓶中，用生理盐水溶解定容，制成1mg·ml-1的贮备液。精密量取贮备液，用生理盐水稀释成系列浓度(C)：45.0、40.0、35.0、30.0、25.0、20.0、15.0、10.0、5.0μg·ml-1，分别在271nm波长处测定其吸光度(A)。以吸光度(A)为纵坐标，以浓度(C)为横坐标，求得标准曲线方程为：A=0.0218C 0.0651,r=0.9921,线性范围为5.00～45.00ug·ml-1。

　　2.4 释放液的制备

　　参照L9(34)正交表［4］，将氮酮(A)、薄荷醇(B)、冰片(C)三个因素每个因素三个水平进行实验。见表1。表1 因素水平表（略）

　　称取适量的双氯芬酸钠，用70%的乙醇溶解成250mg·ml-1的溶液，每个组分别参照L9(34)正交表的前三列(第四列用作空白列)添加适当促透剂及适量70%乙醇配制成释放液，其中每组均含双氯芬酸钠12.5mg·ml-1，各组释放液中促透剂成分及含量见表2。表2 各组促透剂浓度配比（略）

　　2.5 接收液的制备

　　生理盐水作为接收液。

　　2.6 透皮实验

　　常温下解冻皮肤，在双室扩散池［5］上进行体外透皮实验研究。皮肤固定于样品池与接受池之间，角质层面向样品池，接受池注入5ml接收液，样品池注入0.1ml释放液，实验温度为32℃，扩散面积为0.502cm2。在2、4、8、12、24h分别取接收液4ml，同时补回4ml生理盐水，经生理盐水稀释适当倍数后，在271nm测A值，将测得A值代入标准曲线方程求得浓度。

　　2.7 结果处理

　　将测定的浓度结果代入下式，计算累计透过量Q：Q(μg·cm-2)=Cn×5 ∑n-1i=1Ci×4A其中，Cn为第n个取样点的药物浓度(μg/ml),Ci为第i个取样点的药物浓度(μg/ml)，A为扩散面积。以累积透过量Q对时间T进行作图，取曲线前端的直线部分进行线性回归，所得方程的斜率即为透皮速率P；增渗倍数为用药组透皮速率与对照组透皮速率之比；双氯芬酸钠滞后时间(Tlag)的计算参照文献方法进行［6］。数据使用Excel 2003 for Windows软件进行处理，并使用SAS8.0 for Windows进行方差分析［7］。

　　3 结果

　　3.1 各组促透剂对双芬酸钠经皮渗透的影响

　　透皮实验结果见表3。表3 促透剂对双氯芬酸钠经皮渗透的影响(略)

　　对表3中数据进行方差分析，结果见表4。表4 透皮实验结果的方差分析表（略）

　　如表4中所显示，在透皮实验中对指标渗透速率P而言，三种因素(氮酮、薄荷醇、冰片)均对指标影响显著；对指标时滞Tlag和指标24小时累计透过量Q24而言，只有两种因素(氮酮、冰片)对指标影响显著。

　　通过表4的数据，可以看出氮酮在三种促透剂的联合使用时，对双氯芬酸钠的透皮作用影响起着主要作用，冰片作用比较微弱，薄荷醇的作用则更小。在选择最佳配方时，三种指标透皮速率P、时滞Tlag和24小时累计透过量Q24的归一化是必须的。为此我们引入Topsis法，将三种指标化为单指标后进行最佳配方的选择。

　　3.2 Topsis法对透皮实验结果的分析

　　3.2.1 数据的选择

　　由于增渗倍数是由渗透速率直接算得，所以各组取渗透速率P、时滞Tlag、24小时累计透过量Q24三项指标，采用文献［7］所介绍的方法进行Topsis法分析。

　　3.2.2 同趋势化

　　P和Q24为高优指标，无须转化。Tlag为低优指标，使用倒数法进行转化。即：Tlag=1Tlag

　　3.2.3 数据的标准化

　　对P、时滞Tlag和Q24数据进行标准化处理，所得结果见表5。表5 透皮实验各组的标准化数据（略）

　　3.2.4 计算D i、D-i和Ci 分别计算各项指标中的最优和最劣向量(K 、K-)，计算D i、D-i和Ci，结果见表6。表6 透皮实验各组的D i、D-i、Ci值（略）

　　3.3 最优组合的选择

　　以Ci值作为评价指标代入正交实验中进行计算，并用极差法进行统计分析［8］，结果见表7。表7 氮酮、薄荷醇和冰片促透实验的统计分析指标（略）注：K1：各因素1水平的Ci值平均值，K2，K3类推。R：极差，数值等于同系列最大K值与最小K值之差。

　　由表7的R值可见，三种因素对透皮实验结果影响大小顺序应为氮酮>薄荷醇>冰片，与透皮实验方差分析的结果基本吻合；最优条件组合为Ⅰ3Ⅱ3Ⅲ2，即促透剂为2%氮酮、2%薄荷醇和1%冰片。

　　4 讨论

　　氮酮能够增强皮肤角质层脂质的流动性［9］，其促进药物经皮吸收的效果明显，且有低毒性低刺激性的优点。有研究表明氮酮在与离子渗透法联用中显出较好的促透效果，机制可能在与其能降低皮肤层的电阻和对分子大小的选择性［10］。但其对药物经皮吸收时滞的延长一直是该药物作为促透剂的一个弱点。同属萜烯类的薄荷醇和冰片的作用机制可能与氮酮类似，能够促进药物在角质层的扩散，破坏角质层细胞间的脂质屏障，提高组织的电阻率，打开角质层的极性通道，增加药物从基质向角质层的分配［11］。有研究表明薄荷醇在单用时对多种药物均有良好的促透作用［12，13］。在适当的浓度将三者联用，有可能通过作用机制的协同和互补起到较好的促透效果，本次实验的结果也对此进行了验证。

　　Balb/C裸小鼠由于其皮肤结构与人相似，毛囊数目和直径与人皮肤接近，又可避免剃毛步骤造成的误差干扰，近年来已被用于皮肤药理学研究［14］。与它种实验动物皮肤相比较，裸小鼠具有透皮速率常数大和时滞短的特点［15］。用其作为人皮肤的替代品得到的透皮吸收参数具有较重要的参考价值。

　　氮酮、薄荷醇和冰片作为药物透皮吸收促进剂的作用均已得到较广泛的认可［2，3，14］，但联用作为促透剂的效果目前尚缺乏一种科学的评价机制。在多指标正交实验的评价方法中，使用较多的综合平衡法和综合评分法由于关键指标的选择或权重的确定，具有较强的主观性。本研究引入选用的文献［7］所介绍的Topsis法作为近年来应用较多的综合评价方法的代表，对三种促透剂联用效果的正交实验结果进行综合评价。该方法不引入主观权重，在数据标准化时将每项指标均除以该组标准差，消除了指标间数据变异程度不同带来的影响；评价机制更具客观性，便于开发新型经皮给药制剂时对促透剂的使用方案进行合理的选择。

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　　14 冷扬，王晖.盐酸川芎嗪在3种SPF动物皮肤上的透过作用.中国比较医学杂志，2004，14(5)：278.

　　15 张援，许实波，李向阳，等.不同接受液和动物皮肤对格列美脲体外经皮渗透行为的影响.2004，43(5)：86.

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