液相色谱限制性填料在临床药物分析中的应用

来源：核心期刊咨询网时间：2013-03-19 14:2512

摘要：传统液相色谱填料无法实现对复杂生物基质混合体系(如血清或血浆)直接进样分析。蛋白沉淀法样品预处理过程选择性较低，存在未沉淀完全的内源性生物基质残留于提取液中，同时对部分待测物会同蛋白沉淀物发生共沉淀，而导致检测信号衰减。专属性强、选择性高的

传统液相色谱填料无法实现对复杂生物基质混合体系(如血清或血浆)直接进样分析。蛋白沉淀法样品预处理过程选择性较低，存在未沉淀完全的内源性生物基质残留于提取液中，同时对部分待测物会同蛋白沉淀物发生共沉淀，而导致检测信号衰减。专属性强、选择性高的萃取填料的发展，允许生物基质直接多次进样，以降低样品预处理时间。在这些填料中，限制性介质（RAM）被认为是目前最流行的萃取材料之一。1 限制性介质萃取分离机制及分类 RAM包括一个填料家族通过限制大分子物质同填料颗粒核心的相互作用，只允许小分子进入填料核心。大分子物质仅能同填料外表面亲水集团相互作用，减少了基质蛋白的变性吸附。根据填料核心直径的物理屏障或蛋白质及聚合物在填料表面形成的化学扩散屏障，大分子物质可以被洗脱，待测物则通过疏水作用和静电作用保留。按蛋白排阻机制。RAM填料分为：内表面反相填料烷基二醇硅胶填料，键合相多孔硅胶填料，半渗透表面填料，蛋白涂渍硅胶填料，混合功能填料，屏蔽憎水相填料。RAM填料制备的色谱柱直接连接检测器或者在柱切换系统中作为预柱，能够实现自动化并加速样品预处理过程。近几年，这种在线样品萃取技术被广泛应用于在体内药物大规模快速分析中。2 RAM填料单柱系统及柱切换系统在体内药物分析中应用2.1 单柱系统 单柱系统中RAM柱作为萃取柱同时兼有分离作用。RAM柱富集待测组分的同时完成其色谱分离。Huclova等将ADS柱集成连续进样分析系统使用荧光检测器直接测定血清中利尿药呋塞米浓度。该RAM连续进样系统实现了生物样品在线直接自动化进样。整个分析过程包括样品预处理、分析检测及柱平衡，共需20min。血清中呋塞米回收率为101.4％～103.4％。马骏等 使用混合功能填料RAM单柱首次测定了人血浆中抗肿瘤药10-羟基喜树碱羧酸型和内酯型浓度，由于不需要对样品进行预处理，故缩短了生物样品单次分析时间及所需样品量。还同时用直接进样高效液相色谱法及荧光偏振免疫法测定人血浆中抗癫痫药卡马西平浓度，结果显示对于人血浆中卡马西平浓度 的测定两种方法存在较好相关性。该研究为RAM色谱法开展临床药物血药浓度监测提供了依据。2.2 柱切换系统 柱切换系统中RAM柱作为萃取柱，对待测组分起到萃取富集作用。RAM柱后接分析柱，对待测组分进行色谱分离并分析。Baeyens等成功地在柱切换系统中使用烷基二醇硅胶填充的限进预柱测定了马血浆中酮洛芬两种对映体浓度。进样体积为80uL至500uL，取得在20min内

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