核桃分心木水提物抗疲劳作用研究

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摘要：摘 要：目的：研究核桃分心木水提物的抗疲劳作用，为其保健品开发和应用提供科学依据。方法：制备分心木水提物并测定其总多糖、总多酚和总黄酮含量。将小鼠随机分为空白对照组和分心木水提物低、中、高剂量组，连续灌胃14 d，测定小鼠的体重、脏器指数和负重

　　摘 要：目的：研究核桃分心木水提物的抗疲劳作用，为其保健品开发和应用提供科学依据。方法：制备分心木水提物并测定其总多糖、总多酚和总黄酮含量。将小鼠随机分为空白对照组和分心木水提物低、中、高剂量组，连续灌胃14 d，测定小鼠的体重、脏器指数和负重游泳力竭时间，检测血清乳酸(BLA)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素氮(BUN)、肌肉和肝脏糖原含量，以及肝脏丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果：分心木水提物得率为(9.41%±0.82%)，总多糖、总多酚、总黄酮含量分别为(33.40%±0.88%)、(30.80%±2.28%)、(24.62%±0.86%)。分心木水提物对小鼠的体重和脏器指数没有明显影响(P>0.05)，能延长小鼠的负重游泳力竭时间(P<0.01)，并具有剂量依赖性，能降低小鼠BLA和BUN含量，提高LDH活性(P<0.01)。与空白对照组相比，给药组小鼠运动后肝、肌糖原含量增加，肝脏MDA含量降低、SOD活性升高(P<0.01)。结论：分心木水提物能提高小鼠的运动耐力，具有抗疲劳作用。

　　关键词：核桃;分心木;水提物;小鼠;抗疲劳

　　分心木是核桃中夹在核桃仁之间的木质小薄片，体轻、质脆、易折断[1-2]，颜色呈棕色或棕褐色，味苦涩，性平，入脾、肾经，具有固肾涩精功效，可以治疗遗精、遗尿、多汗、泻痢以及失眠多梦等多种疾病[3-4]。药理活性研究表明，分心木除具有补肾作用外，还具有抑菌、抗氧化等作用[5]。然而，人们食用或加工核桃时往往只利用了核桃仁，同时产生的大量分心木除了在少部分地区被用来泡茶喝外，绝大部分都被作为废弃物处理，造成资源的极大浪费[6]。分心木的进一步开发应用对提高核桃附加值，减少浪费具有重要意义。

　　疲劳可导致肌肉力量和耐力下降、运动技能表现下降、身体和心理功能下降等[7]，不仅会影响人们的日常活动，还可能会导致一些疾病的发生[8]。分心木能够改善睡眠，固肾涩精，但目前尚未看到关于分心木抗疲劳方面的研究报道。本实验研究了分心木水提物对小鼠负重游泳时间、负重游泳后BLA、BUN含量和LDH活性的影响，测定了肝、肌糖原及肝脏MDA含量和SOD活性，为分心木在抗疲劳方面的保健品开发和应用提供科学依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料與试剂

　　分心木，购自云南楚雄;肝糖原、肌糖原、BLA、BUN、LDH、MDA和SOD检测试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所;芦丁和没食子酸标准品，购自中国食品药品检定研究院;其他试剂，均为国产分析纯。

　　1.2 实验动物

　　Balb/c小鼠(合格证编号：20130016006241)，雄性，体质量18～22 g，SPF级，购自海军特色医学中心动物中心。

　　1.3 仪器与设备

　　TB-214型电子天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司;JT502N型计重电子秤，上海精天电子仪器有限公司;5418R型台式冷冻离心机，德国Eppendorf公司;759型紫外-可见光分光光度计，上海奥谱勒仪器有限公司;354型酶标仪，美国Thermo公司;Lyolab-3000型真空冷冻干燥机，奥地利Heto-Hotten公司。

　　1.4 方法

　　1.4.1 分心木水提物的制备 称取分心木1 000 g，用蒸馏水清洗干净，加入10 L蒸馏水，浸泡2 h后，100 ℃加热回流提取，提取时间为60 min。收集提取液，过滤，用旋转蒸发仪60℃左右浓缩至200 mL，-70℃预冻6 h，-50℃真空冷冻干燥48 h，即得分心木水提物(AED)。

　　1.4.2 分心木水提物总黄酮含量测定 精确移取浓度为0.1 mg/mL分心木水提物溶液1 mL，置25 mL 的容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，摇匀，静置6 min;加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，静置6 min;加4%氢氧化钠溶液4 mL，加水稀释至刻度线，摇匀，放置15 min，在波长500 nm处测定吸光度，根据标准曲线(标准品为芦丁)计算出样品中总黄酮含量。

　　1.4.3 分心木水提物总多酚含量测定 精确移取浓度为0.1 mg/mL分心木水提物溶液1 mL，加入5.0 mL FolinCiocalteu试剂中，反应4 min 后，加入4.0 mL 75 g/L 的Na2CO3 溶液，置室温下反应120 min，于760 nm 下测定吸光度。根据标准曲线(标准品为没食子酸)计算总多酚的含量。

　　1.4.4 分心木水提物总多糖含量测定 精确移取浓度为0.1 mg/mL分心木水提物溶液1 mL，加入0.5 mL 6%苯酚溶液和5 mL 浓硫酸，沸水浴中加热15 min 后冷却，于490 nm下测定吸光值。根据标准曲线(标准品为葡萄糖)计算样品中总多糖的含量。

　　1.4.5 动物分组及给药 Balb/c小鼠80只，雄性，根据体重随机分为4组，每组20只，分别为空白对照组 (CG)、低剂量组 (LDG)、中剂量组(MDG)、高剂量组(HDG)。CG组以生理盐水灌胃，LDG组剂量为125 mg/kg，MDG组剂量为250 mg/kg，HDG组剂量为500 mg/kg。各组小鼠每天称重，灌胃给药，0.1 mL/10 g，连续14 d。各组小鼠在灌胃期间自由取食和饮水[9]。

　　1.4.6 小鼠负重游泳实验 每组随机挑选10只小鼠，于末次灌胃2 h后，在小鼠尾巴根部负荷8%体重的铅皮，放入水池中游泳，水深30 cm，水温25.0℃，如出现漂浮水面休息的情况，则不断用玻璃棒拨动小鼠强迫游泳，直到力竭为止。记录自游泳开始至头部全部沉入水中 10 s不能浮出水面的时间为小鼠负重游泳力竭时间。休息10 min后，颈椎脱臼处死，解剖取肝脏、肾脏、心脏和脾脏，称重，计算各脏器指数。

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