试论十三种杀菌剂对草莓胶孢炭疽菌的室内毒力测定

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摘要：摘要：在实验室条件下，采用菌丝生长速率法测定了13种杀菌剂对发生在湖北的草莓胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）的生物活性。结果表明，供试杀菌剂对草莓炭疽病菌菌丝抑制作用存在明显差异，对草莓胶孢炭疽病病菌毒力最强的是好立克、丙环咪鲜

　　摘要：在实验室条件下，采用菌丝生长速率法测定了13种杀菌剂对发生在湖北的草莓胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）的生物活性。结果表明，供试杀菌剂对草莓炭疽病菌菌丝抑制作用存在明显差异，对草莓胶孢炭疽病病菌毒力最强的是好立克、丙环·咪鲜胺和施保功，其EC50值分别为0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L，福星、施保克、百泰、世高、凯特、溴菌腈和凯润的EC50值均相对很低，这10种杀菌剂均可作为防治草莓胶孢炭疽病的首选杀菌剂；腈菌唑、翠贝和二氰蒽醌的抑制活性较差，EC50值分别为12.12、17.58和106.99 mg/L。

　　关键词：草莓炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）；毒力测定；杀菌剂；筛选

　　草莓（Fragaria ananassa Duchesne）有“果中皇后”之称，营养丰富，经济价值很高。自1931年首次报道草莓炭疽病以来，已有多国报道该病的发生，其广泛的传播性和潜在危害已被广泛关注[1]。高温湿润的气候条件适宜该病发生。因此，其对7～8月份草莓生产苗繁育造成的损失尤为严重。我国于1997年由叶正文等首次发现草莓炭疽病，湖北省该病发生越来越重，严重阻碍了草莓产业的发展，尤其是在高温多湿的育苗季节更为严重。目前对该病害的研究主要有叶正文等对抗病品种筛选、龙军等[3-9]对该病原菌生物学特性的研究等，针对防治该病害的农药筛选研究很少。作者力求筛选出对草莓胶孢炭疽病病菌毒力大、抑菌效果好的杀菌剂供生产上使用。因此试验选用13种杀菌剂作为供试药剂，采用菌丝体生长速率法对草莓胶孢炭疽病病菌进行室内毒力测定，以期筛选出对草莓胶孢炭疽病病菌毒力强的杀菌剂，为防治草莓炭疽病提供参考。

　　1 材料与方法

　　1.1 供试菌株

　　草莓炭疽病病原菌来源于湖北省农业科学院经济作物研究所分离，并通过分子鉴定保存的炭疽病病原胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides （Penz.） Sacc][10]，经过单孢纯化后获得供试菌株。

　　1.2 供试药剂

　　经预备试验筛选出以下几种药剂做药效测定。

　　1.3 杀菌剂室内毒力测定

　　采用杀菌剂室内生长速率法测定[10]。上述药剂均用无菌水配制成系列浓度梯度的溶液，在无菌操作台上将不同梯度的药剂加入到灭过菌的冷却到40～50 ℃的PDA培养基中，倾入后立即水平方向平稳摇动三角瓶，使药剂在培养基中均匀分布后倒平板。在每个平板中央接入一块直径为0.5 cm的菌苔，以不加药剂为空白对照。25 ℃恒温黑暗培养6 d后用“垂直十字交叉法”测量菌落直径，检查药剂的抑菌效果，每处理5皿，重复3次。

　　将PDA培养基放入121 ℃高压灭菌20 min。按每个三角瓶分装60 mL。分装后放在无菌操作台上，用移液枪移入被稀释后的不同浓度的农药，并摇匀。然后快速将其分别倒入3个培养皿中。每个培养皿倒入20 mL，待其冷却凝固后在培养皿左上方贴标签纸标记（预备做农药抑菌试验的农药的编号），然后用打孔器将供实验菌打孔，移入培养皿内。然后将培养皿倒置于培养箱中，25 ℃恒温黑暗培养6 d，观察并测定抑菌圈直径。检查药剂的抑菌效果，每处理3皿，重复3次。通过十字交叉法对抑菌圈的大小进行测定。

　　抑菌率=■×100%

　　将药剂对菌丝的抑制率转换成几率值（y），药剂各浓度（mg/L）转换成对数值（x），进行线性回归分析，求出毒力回归方程和相关系数，最后计算出各药剂对病菌菌丝生长的抑制中浓度（EC50）。

　　1.4 数据分析

　　试验数据的分析均用SPSS 11.5和Excel 2003完成。

　　2 结果与分析

　　2.1 杀菌剂对病原菌EC50的比较

　　不同药剂对炭疽病病原菌菌丝生长的抑制中浓度（EC50）。可以看出，13种药剂对炭疽病病原菌菌丝的生长速度具有不同程度的抑制作用，抑制效果表现出明显的差异。

　　从各药剂的毒力回归方程和EC50可以看出，13种药剂中好力克、丙环·咪鲜胺和施保功3种杀菌剂对病菌的毒力作用最强，EC50值分别为0.002 2、0.005 6和0.009 3 mg/L；其次是福星，EC50为0.17 mg/L；施保克EC50为1.11 mg/L，百泰EC50为1.23 mg/L，凯特EC50为1.57 mg/L，世高EC50为1.83 mg/L，凯润EC50为4.22 mg/L，溴菌腈EC50为4.42 mg/L，相对较低；而腈菌唑、翠贝和二氰蒽醌对病菌的抑制作用差，其中二氰蒽醌的抑制作用最差，EC50值达到106.99 mg/L。

　　2.2 病原菌对杀菌剂的敏感性比较

　　回归方程的斜率越大，表明病菌对该杀菌剂的敏感性越差。杀菌剂按照斜率值从大到小排序依次为二氰蒽醌、腈菌唑、溴菌清、施保克、翠贝、凯润、凯特、世高、百泰、福星、施保功、好立克和丙环·咪鲜胺，说明病菌对施保功、好立克和丙环·咪鲜胺最敏感。

　　3 讨论

　　通过分析各药剂的毒力回归方程斜率值与其EC50值，综合分析认为溴菌清、施保克、凯润、凯特、世高、百泰、福星、施保功、好立克、丙环·咪鲜胺10种药剂的抑菌效果较好。其中施保克对病菌的EC50值较低，且斜率值较高，成为最具潜力的使用药剂。其他药剂也具有很好的应用价值，在生产上可以轮换使用，防止病菌产生耐药性。

　　筛选出的10种杀菌剂有着不同的作用方式，其中施保克为咪唑类杀菌剂，主要作用方式是抑制甾醇类生物合成，虽然不具有内吸作用，但具有一定的传导性能。苯醚甲环唑、丙环唑、氟硅唑、戊唑醇属于三唑类杀菌剂，其作用机理为影响甾醇类生物合成，使菌体细胞膜功能受到破坏，具有内吸性。吡唑醚菌酯是甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，来源于天然抗生素，为线粒体呼吸抑制剂，不仅具有广谱的生物活性，更具有高度的选择性，对环境安全。室内药剂筛选的结果虽可以看出药剂对菌丝具有抑制作用，但由于受很多因素的影响，培养皿内的抑菌活性和在田间使用上的作用效果不一定完全一致，因此还有待作进一步田间的防治效果试验。

　　参考文献：

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