不同品种桑葚叶总酚含量及其抗氧化活性比较

来源：核心期刊咨询网时间：2021-05-20 11:1512

摘要：摘 要：为了研究不同品种桑葚叶的总酚含量差异及应用价值，以收集引种的40个品种桑葚叶为研究对象，采用超声波辅助提取桑葚叶中酚类物质，以总酚提取率为指标，利用单因素试验和正交试验考察各因素对超声辅助提取桑葚叶总酚提取率的影响;采用DPPH自由基清除

　　摘 要：为了研究不同品种桑葚叶的总酚含量差异及应用价值，以收集引种的40个品种桑葚叶为研究对象，采用超声波辅助提取桑葚叶中酚类物质，以总酚提取率为指标，利用单因素试验和正交试验考察各因素对超声辅助提取桑葚叶总酚提取率的影响;采用DPPH自由基清除能力评价不同品种桑葚叶提取物的抗氧化能力，同时对不同品种桑葚叶中总酚含量及其抗氧化能力进行相关性分析。结果表明：超声辅助提取桑葚叶总酚的最佳工艺条件为：超声温度65 ℃、超声时间30 min、固液比1∶45(g/mL)、乙醇浓度60%，4个因素对桑葚葉总酚提取率影响大小顺序为：超声温度>超声时间>固液比>乙醇浓度。不同品种桑葚叶总酚含量差异较大，其中‘条桑五号’总酚含量最高，为(26.35 ± 0.29)mg/g，‘滇桑’总酚含量最低，为(20.44 ± 0.15)mg/g;不同品种桑葚叶抗氧化活性也存在差异，且趋势与总酚含量基本一致，‘条桑五号’桑葚叶抗氧化活性最强，清除DPPH自由基能力IC50为(77.64 ± 0.34)mg/L，总抗氧化能力(FRAP)TEAC值为(2.58 ± 0.11)mmol/g;‘滇桑’桑葚叶抗氧化活性最弱，清除DPPH自由基能力IC50为(210.30 ± 0.19)mg/L，总抗氧化能力(FRAP)TEAC值为(0.73 ± 0.04)mmol/g。桑葚叶总酚含量与其提取物抗氧化能力呈正相关，选择总酚含量高的桑葚品种栽培，可提高桑葚的综合附加值。

　　关键词：不同品种桑葚叶;总酚;抗氧化

　　桑葚(Folium Mori)，桑科落叶灌木或小乔木植物，别名家桑、荆桑、桑葚树、黄桑叶、桑枣树等[1-3]。全球50%的国家种植桑树，主要分布于中国、韩国及日本等国家，而我国是最大的桑树种植国。桑葚叶是桑树的主要产物、蚕的日常食物，产量丰富[4]。完整叶片呈卵形、宽卵形、心形、圆状形等，单叶互生，上表面无毛，有光泽，下表面绿色，脉上有疏毛[5]。桑葚叶营养成分非常丰富，主要成分有黄酮类、生物碱、植物甾醇、-氨基丁酸、桑叶多糖等[4， 6-9]。桑葚叶中的营养成分随桑葚品种、采收时间、产地等有明显不同。桑葚叶具有抗衰老、抗疲劳、抗病毒、抗肿瘤、抑菌、抗炎、降血脂、降胆固醇、降血压等药用价值[10-12]，同时具有养颜、美容之功效。在中国就有桑叶制茶的历史，誉为“神仙茶”，而在日本则被称为“长壽茶”[13-14]。

　　每年为果实增产而进行短截修枝而产生大量桑葚叶，桑葚叶占桑园年产干物质量的36%左右[13]。桑叶虽主要用于传统的养蚕业和制茶业，但供大于求，造成严重资源浪费[15]，如何充分利用桑葚产业的副产品，为农民增产增收，实现产业化可持续发展是现阶段的关键问题。而目前为响应国家政策，以可持续发展为战略目标，以采摘、亲子游等形式的休闲农业蓬勃发展，桑葚作为主要模式果树品种，其品种繁多，且多数研究主要集中在不同品种果实品质评价和比较方面，甚少关于不同品种间桑葚叶活性成分含量差异比较、抗氧化活性差异比较的研究，忽视了桑葚叶的价值，大大降低了其综合附加值。因此对桑葚叶全面、高效地开发和利用，进一步发掘其经济附加值是急需解决的重要问题之一。

　　为了比较品种间桑葚叶活性成分含量与抗氧化活性的差异，本试验以超声波辅助提取法提取不同品种桑葚叶中的总酚，并优化其提取条件;采用清除DPPH自由基测定方法对桑葚叶提取物抗氧化能力进行评价;比较不同品种桑葚叶总酚含量和抗氧化能力，为桑葚叶资源的进一步开发利用，增加桑葚综合附加值提供数据支持，并对桑葚深加工产业发展提供理论指导，为桑葚品种栽培开辟了新的思路。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　原料：40种不同品种桑葚叶，采自中国热带农业科学院南亚热带作物研究所桑葚种植基地。品种名称及编号见表1。

　　试剂：DPPH，购自Sigma公司;维生素C(>99.0%)，河北源创生物科技有限公司;没食子酸，国药集团化学试剂有限公司;福林酚(1 mol/L)，源叶生物;其他试剂均为分析纯。

　　仪器设备：高速药材调料粉碎机，FZ-06，浙江温岭市百乐粉碎设备厂;旋转蒸发仪，Heidolph Hei-VAP Preciscion，德国海道尔夫公司;纯水仪，RODI-220A1，厦门锐思捷水纯化技术有限公司;酶联免疫分析仪，Spark 10M，帝肯(上海)贸易有限公司;超声波提取仪，SK5210HP，上海科导超声仪器有限公司;台式高速冷冻离心机，MULTIFUGEXIR，美国Thermo公司。

　　1.2 方法

　　1.2.1 样品溶液的制备 分别摘取40种不同品种桑葚叶，准确称取每个品种的鲜重，在干燥箱中(50 ℃)将其烘干至重量恒定，用粉碎机将其粉碎，密封保存于冰箱作为待测品。准确称取1.0 g待测品至锥形瓶中，加入一定浓度的乙醇溶液，密封瓶口，在不同提取温度、乙醇浓度、时间、固液比条件下进行提取，再过滤，得到上清液，重复提取3次，合并上清液。用旋转蒸发仪蒸干溶剂，称取质量，再溶解定容至10 mL。

　　1.2.2 提取方法 (1)超声波辅助提取方法。选择广泛种植的品种‘大十’，作为优化提取工艺的材料。准确称取1.0 g‘大十’桑葚叶至锥形瓶中，按固液比1∶30(g/mL)加入50%的乙醇溶液，锥形瓶用封口膜封口，在30 ℃超声提取20 min。过滤取上清液，重复提取3次。用旋转蒸发仪蒸干溶剂，称量，再溶解定容至10 mL，测定其中总酚含量，计算提取率。

　　(2)传统提取方法。准确称取1.0 g‘大十’桑葚叶至锥形瓶中，按固液比1∶30(g/mL)加入50%的乙醇溶液，锥形瓶用封口膜封口，在30 ℃水浴中提取20 min，提取结束后操作同上。

　　1.2.3 桑葚叶总酚提取的单因素实验 (1)乙醇浓度对桑葚叶总酚提取率的影响。准确称取1.0 g‘大十’桑葚叶至锥形瓶中，按固液比1∶30(g/mL)加入不同浓度(0、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%)的乙醇溶液，锥形瓶用封口膜封口，在30 ℃超声提取20 min。过滤取上清液，重复提取3次。用旋转蒸发仪蒸干溶剂，称量，再溶解定容至10 mL，测定其中总酚含量，计算提取率。

　　(2)超声温度对桑葚叶总酚提取率的影响。准确称取1.0 g‘大十’桑葚叶至锥形瓶中，按固液比1∶30(g/mL)加入60%的乙醇溶液，锥形瓶用封口膜封口，在不同超声温度(30、40、50、60、70 ℃)下超声提取20 min。过滤取上清液，重复提取3次。用旋转蒸发仪蒸干溶剂，称量，再溶解定容至10 mL，测定其中总酚含量，计算提取率。

　　(3)超声时间对桑葚叶总酚提取率的影响。准确称取1.0 g‘大十’桑葚叶至锥形瓶中，按固液比1∶30(g/mL)加入60%乙醇溶液，锥形瓶用封口膜封口，在60 ℃下超声提取不同时间(20、30、40、50、60、70 min)。过滤取上清液，重复提取3次。用旋转蒸发仪蒸干溶剂，称量，再溶解定容至10 mL，测定其中总酚含量，计算提取率。

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